المجهر الالكتروني Electron Microscope
المجهر الإلكتروني النافذ والماسح ، الميكروسكوب ـ electron microscope
ملاحظة : هنالك روابط لتحميل ملفات على المجاهر الإلكترونية في الأسفل ، من نوع doc ، pdf ، ppt
ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ
المجهر الالكتروني Electron Microscope
تمتاز هذه
المجاهر بقوة تكبير عالية جداً قد تصل إلى أكثر من
مليون مرة كما أن مصدر الإضاءة فيها عبارة عن حزم من الالكترونات
والعدسات المستخدمة فيها هي عدسات كهرومغناطيسية ومنها الأنواع التالية:
المجهر الالكتروني النافذ :(Transmission electron microscope)
وهو من أول
المجاهر الالكترونية التي تم استخدامها في دراسة الخلية
حيث بدأ العلماء باستخدام هذا النوع من المجاهر الالكترونية في
الخمسينات من القرن الماضي وقد كان للمجهر الالكتروني النافذ الدور الكبير في دراسة التركيب الدقيق للخلية واكتشاف
العديد من عضياتها المتناهية في الصغر والتي كان من
المتعذر رؤيتها بواسطة المجهر الضوئي ويتكون المجهر
الالكتروني النافذ من مصدر الكترونات والذي
تنبعث منه حزمة مكثفة من الالكترونات تمر خلال مكثف ثم تخترق حزمة الالكترونات العينة المراد فحصها والتي يشترط
أن يتراوح سمكها بين 0.01 – 0.2 ميكرومتر ثم تمر
الالكترونات بالعدسات الكهرومغناطيسية الشيئية فالعدسات الكهرومغناطيسية
العينية حتى تصل إلى المسرح وهو عبارة عن شاشة فلوروسنتية
(Fluorescent screen) والتي تصطدم بها الالكترونات وعليها تظهر صورة
العينة فالأجزاء الكثيفة من العينة والتي لم تخترقها
الالكترونات يمكن رؤيتها بألوان داكنة أما الأجزاء
الرقيقة والتي نفذت منها الالكترونات فيمكن رؤيتها بألوان فاتحة وهكذا فان درجة التباين والوضوح تعتمد على كمية الالكترونات
النافذة خلال العينة و يمكن طبع صورة العينة على فيلم
بواسطة كاميرا.
المجهر الالكتروني الماسح (Scanning electron microscope) :
وهو من المجاهر
الحديثة و تركيب المجهر الالكتروني الماسح يشبه المجهر
الالكتروني النافذ من حيث مصدر الإضاءة والعدسات المستخدمة إلا
أنه يختلف عن النافذ في كيفية إظهار صورة العينة حيث يعتمد إظهار الصورة في هذا النوع من المجاهر الالكترونية على
الالكترونات المرتدة من على سطح العينة لتظهر على شاشة
تلفزيونية وعادة ما يستخدم المجهر الالكتروني الماسح في دراسة العينة
كاملة أو جزء منها.
ـ
المجهر الالكتروني الماسح (Scanning electron microscope) :
وهو من المجاهر الحديثة و تركيب المجهر الالكتروني الماسح يشبه المجهر الالكتروني النافذ من حيث مصدر
الإضاءة والعدسات المستخدمة إلا أنه يختلف عن النافذ في كيفية إظهار
صورة العينة حيث يعتمد إظهار الصورة في هذا النوع من
المجاهر الالكترونية على الالكترونات المرتدة من على سطح العينة
لتظهر على شاشة تلفزيونية وعادة ما يستخدم المجهر الالكتروني الماسح في دراسة العينة كاملة أو جزء منها.
تحضير العينة Tissue Processing
لمشاهده العينه تحت المجهر الالكتروني الماسح
لابد من اجراء المعاملات التاليه:
1ـ قمنا بعمل طرد مركزي للبيئه البكتيريه
لمده 5 دقائق.
2ـ نتخلص من الرائق ونضع Buffer
phosphate (PH=7.2) للمحافظه على اسموزيه الخلايا البكتيريه.
3ـ نعمل طرد مركزي للتخلص من المحلول
المنظم.
4ـ نقوم بعملية التثبيت Fixation ويتم باستخدام 2% Bufferd Glutraaldhyd لمده ساعه وله اهميه في تثبيت الجليكوجين والبروتين في الخلايا وهذه
الخطوه هي ماتعرف بالتثبيت الاولي، ثم نعمل طرد مركزي للتخلص من السائل.
5ـ ثم نقوم بعمليه التثبيت الثانوي ويتم
باستخدام 1%Bufferd Osmic acid لمده نصف ساعه ولها اهميه في تثبيت الماده الدهنيه في الخلايا
وتستخدم كصبغه اوليه وتساعد على زياده عمليه التوصيل الكهربائي بين العينه وشعاع
الحزم الالكترونيه ممايؤدي الى زياده التباين، ثم نقوم بعمليه الطرد المركزي
للتخلص من السائل.
6ـ ثم نضيف المحلول المنظم ونضعها في
الثلاجه (وضعت في الثلاجه فقط لحفظها لليوم التالي لاكمال خطوات التجفيف).
7ـ نقوم بعمليه التجفيف فنعمل طرد مركزي
للتخلص من المحلول المنظم ثم نبداء باضافه الكحول من التركيز 30% وتترك 10 دقائق ثم نعمل طرد مركزي ونتخلص من
الكحول ثم نضيف تركيز 50%
ونتركها 10 دقائق ثم نعمل طرد مركزي ونتخلص من الكحول ثم نضيف تركيز 70% ونتركها 10 دقائق ثم نعمل طرد مركزي ونتخلص
من الكحول ثم نضيف 90%
ونتركها 10 دقائق ثم نعمل طرد مركزي ونتخلص من الكحول ثم نضيف 95% ونتركها 10 دقائق ثم نعمل طرد مركزي ثم نضيف
100%
ونتركها 10 دقائق ونعيد تركيز100 مره اخرى.
8ـ قمنا بسحب الخلايا والكحول بمحقنه ثم
قمنا يتمريرها من خلال مرشح يحتوي على ورقه ملي بور صغيره وهي السطح التي تحتوي
على الخلايا البكتيريه ثم نظعها في طبق بتري حتى تجف من الكحول.
9ـ نقوم بتحميل الخلايا على حوامل العينات
وذالك بالصق بشريط لاصق مزدوج الوجه فيلتصق الورقه من الجهه السفليه بالحامل وتقص
الزوائد من ورقه الترشيح بواسطه المقص وتوضع في غرفه التبخير بالتفريغ حيث يتم
تبخير العينه باحد المعادن وتطلى بطبقه من الذهب او البلاتين وتتراوح سمكها من
10-30 نانوميتر.
ثم توضع العينات في المكان المخصص لها
ويتم فحصها تحت المجهر.
*****************************
إعداد: زرغونه محمد انور شنواري
تحت اشراف: د. نجوى عارف
المملكة العربية السعودية
جامعة الملك سعود
قسم الدراسات العليا
أحياء الدقيقة
ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ
يمكنكم من أدناه
